體內(nèi)堿性彗星試驗(yàn)在化合物遺傳毒性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用日益廣泛。ICH S2(R1)已將肝臟彗星試驗(yàn)列為第2個(gè)組織/終點(diǎn)的體內(nèi)試驗(yàn);體內(nèi)哺乳動(dòng)物堿性彗星試驗(yàn)的指導(dǎo)原則(TG489)也已頒布。體內(nèi)堿性彗星實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驒z測(cè)DNA鏈斷裂、堿性不穩(wěn)定位點(diǎn)、不完整切除修復(fù)引起的DNA鏈的斷裂,能夠制成合適細(xì)胞懸液的組織DNA損傷。與其他試驗(yàn)相比其檢測(cè)的是單細(xì)胞水平的DNA損傷,因此該試驗(yàn)敏感性較高,操作簡(jiǎn)單,經(jīng)濟(jì)省時(shí)。
彗星實(shí)驗(yàn)(comet assay)也稱單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)(single cell gel electrophoresis.SCGE),是一種有效評(píng)估DNA損傷的方法。其原理是器官或組織經(jīng)處理(如輻射、重金屬等)后,細(xì)胞中的DNA發(fā)生單鏈或雙鏈斷裂,經(jīng)細(xì)胞及其核膜裂解后,DNA解旋,在電場(chǎng)作用下,DNA 斷片遷移出細(xì)胞核,形成彗星狀的電泳圖譜。正常細(xì)胞的大分子DNA在電場(chǎng)作用下遷移距離較短,DNA仍保留在細(xì)胞核的范圍,形成圓形或輕微拖尾的圖譜。根據(jù)電泳緩沖液的pH值不同,可分為中性彗星實(shí)驗(yàn)(pH=8.4)和堿性彗星實(shí)驗(yàn)(pH>13)。中性彗星實(shí)驗(yàn)主要用于檢測(cè)DNA雙鏈的斷裂損傷,堿性彗星實(shí)驗(yàn)具有更高的靈敏性,可用于檢測(cè)更少量的單鏈和雙鏈斷裂損傷。
需要注意的是,試驗(yàn)過(guò)程中的個(gè)方面,包括樣品準(zhǔn)備、電泳條件、視覺分析參數(shù)(如染色強(qiáng)度、顯微鏡光強(qiáng)度以及使用顯微鏡濾鏡和相機(jī)動(dòng)態(tài)和環(huán)境條件(如背景照明)已經(jīng)被研究,可能影響DNA遷移。
TG489 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay,2016,OECD Guideline for the Testing of Chemicals
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